Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный ви антигенный жидкий

Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный ви антигенный жидкий

Назначение диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного Vi-антигенного жидкого для РПГА

Набор реагентов предназначен для выявления антител к Vi-антигену возбудителя брюшного тифа в сыворотках крови реакцией пассивной гемагглютинации (РПГА).

Принцип метода

При наличии антител к возбудителю брюшного тифа наблюдается гемагглютинация сенсибилизированных Vi-антигеном куриных эритроцитов, что приводит к образованию на дне U-образных лунок планшета «зонтика» из осевших эритроцитов. При отсутствии антител к возбудителю брюшного тифа осевшие эритроциты образуют «точку».

Характеристика набора

Набор рассчитан на исследование 42 сывороток крови в варианте скрининга или 10 сывороток крови в варианте их раститровки.

Меры предосторожности при работе с диагностикумом эритроцитарным сальмонеллезным Vi-антигенным жидким для РПГА

Набор предназначен только для in vitro диагностики. Компоненты набора безопасны. Однако исследуемые сыворотки крови, а также находившиеся с ними в контакте реагенты, оборудование и инструменты могут представлять собой потенциально инфекционный материал. При работе с ними следует принимать следующие меры предосторожности:

  • работать в резиновых перчатках;
  • после завершения работы исследуемые образцы сыворотки крови, находившиеся с ними в контакте реагенты и инструменты дезинфицировать растворами 6 % перекиси водорода, или 70 % этилового спирта, или 3 % хлорамина Б в соответствии с СП 1.3.2322-08.

При работе с набором следует соблюдать «Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

Дополнительные материалы и оборудование

Материалы: наконечники одноразовые вместимостью 200 или 300 мкл, наконечники одноразовые вместимостью 1 мл; перчатки хирургические резиновые; спирт этиловый; хлорамин Б; водорода перекись.

Оборудование: дозаторы пипеточные 1-канальные с переменным объёмом от 5 до 50 мкл, от 20 до 200 мкл и от 200 до 1000 мкл; дозаторы пипеточные 8-канальные с переменным объёмом от 5 до 50 мкл и от 50 до 200 мкл.

Проведение анализа

Подготовка исследуемых образцов

Исследуемые образцы сыворотки крови хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 3 суток от момента взятия крови. Допускается хранение сыворотки в замороженном состоянии при температуре минус 18 °С и ниже не более 1 года. Перед использованием образцы размораживают при комнатной температуре и перемешивают встряхиванием. Повторное замораживание не допускается. Нельзя использовать образцы с выраженным бактериальным проростом.

Подготовка контрольной сыворотки (К+)

Готовят рабочий раствор сыворотки сальмонеллезной адсобированной, рецептор Vi (К+) в разведении 1:10. Для этого содержимое флакона с К+ растворяют добавлением 1 мл раствора ФБР. Хранят (аликвотами по 0,2 мл) в замороженном состоянии при температуре минус 18 °С и ниже не более 6 месяцев.

Подготовка эритроцитарного диагностикума (СЭД)

К содержимому флакона с СЭД добавляют 3 мл раствора ФБР. Хранят при температуре от 2 до 8 °С не более 6 месяцев. Замораживание не допускается.

Постановка РПГА при скрининге сывороток крови

Сыворотки крови для скринингового исследования разводят в лунках планшета следующим образом:

  • предварительные разведения 1:20 готовят в лунках планшета, внося в них сначала 190 мкл раствора РИП, добавляя затем по 10 мкл исследуемых сывороток и перемешивая пипетированием (при этом цвет раствора в лунках после добавления сывороток должен измениться с сине-фиолетового на зеленый);
  • скрининговые разведения 1:40 готовят в других лунках, внося в них сначала по 25 мкл раствора ФБР, добавляя затем по 25 мкл предварительно разведенных сывороток и перемешивая пипетированием.

При каждой постановке РПГА необходимо проводить контрольное определение титра К+. Для этого в 8 лунок вносят по 50 мкл раствора ФБР. Затем в первую лунку вносят 50 мкл рабочего раствора К+, перемешивают пипетированием и переносят в следующие лунки по 50 мкл, получая 2-кратные разведения от 1:20 до 1:2560. Еще в 4 лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР для контроля СЭД на отсутствие спонтанной гемагглютинации.

Далее в лунки со скрининговыми разведениями исследуемой сыворотки и контролями вносят по 25 мкл СЭД. Суспензию СЭД во флаконе или ванночке перед использованием перемешать! После внесения СЭД содержимое лунок перемешивают постукиванием о край планшета. Планшет выдерживают при комнатной температуре в течение 30 — 40 минут.

Учет результатов при скрининге сывороток крови

Учет результатов проводят по условной шкале четырех крестов:

++++ (4+) — эритроциты образуют на дне лунки перевернутый «зонтик», края его опадают;
+++ (3+) — эритроциты образуют на дне лунки перевернутый «зонтик», края его ровные;
++ (2+) — эритроциты образуют на дне лунки тонкое кольцо;
+ (1+) — эритроциты образуют на дне лунки плотное кольцо или диск;
(-) — эритроциты образуют на дне лунки точку.

Положительным результатом считают агглютинацию нагруженных Vi-антигеном эритроцитов не менее, чем на 3 креста (+++).

Контролем качества диагностикума служат 4 лунки контрольного ряда, в которые вносили только раствор ФБР и СЭД. В этих лунках не должно быть спонтанной агглютинации (-). В противном случае следует повторить исследование с диагностикумом другой серии.

Сыворотки с отрицательным результатом следует считать не содержащими антител к Vi-антигену в диагностическом титре 1:40.

Сыворотки, дающие положительный результат в разведении 1:40, следует исследовать повторно в варианте с раститровкой сыворотки для установления ее титра.

Результаты можно считать достоверными только в том случае, если титр прилагаемой контрольной сыворотки (К+) не ниже, чем 1/2 титра, указанного на этикетке.

Постановка РПГА при раститровке сывороток крови

Раститровку исследуемых сывороток и рабочего раствора К+ проводят в коротких рядах планшета. Еще один короткий ряд используют для контроля на отсутствие спонтанной гемагглютинации СЭД.

В первую лунку ряда для раститровки исследуемой сыворотки вносят 180 мкл раствора РИП. Во все остальные лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР.

В лунки ряда для контроля диагностикума на отсутствие спонтанной агглютинации вносят по 50 мкл раствора ФБР.

В лунки с раствором РИП вносят 20 мкл исследуемых сывороток. Каждую сыворотку вносят своим наконечником и перемешивают раствор в лунке трехкратным пипетированием. При этом цвет раствора в лунках должен измениться с сине-фиолетового на зеленый.

В первую лунку ряда для раститровки К+ вносят 100 мкл рабочего раствора К+, в остальные лунки вносят по 50 мкл раствора ФБР. Затем из первых лунок рядов для исследуемых сывороток и контрольной сыворотки переносят по 50 мкл в следующие лунки рядов, получая 2-кратные разведения от 1:20 до 1:1280.

Во все лунки кроме первых лунок каждого ряда вносят по 25 мкл СЭД. Суспензию СЭД во флаконе или ванночке перед использованием перемешать! После внесения СЭД содержимое лунок перемешивают постукиванием о край планшета. Планшет выдерживают при комнатной температуре в течение 30 — 40 минут.

Учет результатов при скрининге сывороток крови

Титром сыворотки считается ее разведение, дающее гемагглютинацию не менее, чем на 3 (+++) креста.

Контролем качества диагностикума служат лунки ряда для контроля СЭД. В этих лунках не должно быть спонтанной агглютинации (-). В противном случае следует повторить исследование с диагностикумом другой серии.

Лица, у которых обнаружены антитела к Vi-антигену в титре 1:40 и выше, рассматриваются как подозрительные на хроническое носительство возбудителя брюшного тифа. Для окончательной постановки диагноза необходимо углубленное бактериологическое обследование.

Результаты можно считать достоверными в том случае, если титр прилагаемой контрольной сыворотки (К+) не ниже, чем 1/2 титра, указанного на этикетке.

Условия транспортировки и хранения, срок годности диагностикума эритроцитарного сальмонеллезного Vi-антигенного жидкого для РПГА

  • Транспортирование в соответствии с СП.3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С. Допускается кратковременное (в течение до 10 сут.) транспортирование при температуре от 10 до 25 °С.
  • Хранение в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С.
  • Срок годности — 1 год. По истечению срока годности набор реагентов использованию не подлежит.

Главная :: Каталог «Агглютинационные тесты РПГА, РТГА, РА» :: Список инструкций



Source: www.dntpasteur.ru


Добавить комментарий